酸奶饮料中低聚木糖的测定

原理:酸奶饮料中蔗糖、乳糖及添加剂干扰低聚木糖组分的分离,为了更准确地测定酸奶中低聚木糖的含量,将酸奶饮料用氢氧化铜沉降蛋白、脂肪,再用60%乙醇水溶液沉降去除大分子多糖及高聚合度低聚糖,而后进行硫酸水解,低聚木糖组分水解变为木糖。
酸奶饮料中低聚木糖含量即为酸奶饮料中水解前后木糖含量的差值。

步骤:1.试剂:

4mol/L硫酸:98%硫酸用水稀释而成,需标定较准确浓度;

45%氢氧化钠:取22.5g氢氧化钠,加入50ml水溶解即可;

4%氢氧化钠:取8.0g氢氧化钠,加入200ml水溶解即可;

7%硫酸铜:取35.0g硫酸铜结晶,加入500ml水溶解即可。
无水乙醇、乙腈。

2.仪器及色谱条件:

仪器:高压液相系统:515高压泵、U6K进样阀、柱温箱、2414示差折光检测器、色谱工作站,真空泵或电吹风。

色谱条件:色谱柱:键合氨基柱;

流动相:乙腈∶水;流速:1.0ml/min;柱温:35℃;示差检测器温度:35℃。
3.样品预处理:

取10.0ml酸奶饮料,加入水20ml,摇匀,加入7%硫酸铜,4%氢氧化钠4.0ml,加水定容100ml,摇匀;

滤纸过滤,取滤液50.0ml,浓缩至10.0ml,加入无水乙醇12.0ml,沉降聚合度高的低聚糖;

用0.45μm膜过滤,用电吹风吹赶尽乙醇,用水溶解定容至10.0ml;

取9.0ml于水解管中,加入4mol/mlH2SO41.62ml,摇匀,于100℃水解1小时,冷却;

用45%NaOH中和,加入少量活性炭粉脱色,冷却;

滤纸过滤,取清液3.0ml,加入12.0ml无水乙醇,摇匀;

当有Na2SO4析出时,用0.45μm水相膜过滤,取滤液10.0ml,电吹风吹干;

加水溶解,定容1.0ml,用0.45μm水相膜过滤,上机测定。
4.总稀释体积:V=100×10/50×/9.0×/3.0/10.0×1.00=13.4ml。

5.计算:以木糖为标样,外标单点校正。

Mi=Aspl/Astd×Cstd×V×10-3/W×100低聚木糖含量X=M2-M1M2:酸奶饮料水解后低聚木糖含量;M1:酸奶饮料水解前低聚木糖含量;

Aspl:样品中木糖组分峰面积;

Astd:标样木糖组分峰面积;

Cstd:标样木糖组分浓度;V:总稀释体积;W:样品重量。

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